环状RNA circ0025847通过促进RNA结合蛋白QK1表达抑制结直肠癌细胞的增殖

摘要

目的探讨环状RNA circ0025847对结直肠癌细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法即时聚合酶链锁反应（real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR）法检测人结直肠癌细胞（HCT116, SW480）和人正常结肠上皮细胞（NCM460）中circ0025847和QK1的表达水平。CCK-8检测circ0025847和QK1对结直肠癌细胞增殖的影响。采用生物信息学方法筛选可与circ0025847结合的RNA结合蛋白（RNA-binding protein, RBP）。RNA pulldown和RNA结合蛋白免疫沉淀（RNA binding protein immunoprecipitation, RIP）实验检测circ0025847是否与QK1结合。蛋白免疫印迹法（western blot）分析过表达circ0025847后QK1的表达水平。设置阴性对照组（NC组）, circ0025847过表达组和circ0025847过表达组+ QK1抑制组, CCK8法观察结直肠癌细胞增殖。结果 circ0025847在NCM460、HCT116和SW480细胞中的表达水平分别为（1.01±0.05）、（0.49±0.08）和（0.45±0.10）, QK1在NCM460、HCT116和SW480细胞中的表达水平分别为（0.98±0.07）、（0.50±0.07）和（0.47±0.09）, 二者均在结直肠癌细胞中低表达。过表达circ0025847和QK1可抑制结直肠癌细胞的增殖。RNA pulldown和RIP实验证实circ0025847和QK1可直接结合。circ0025847可正调控QK1的表达（7 199.20±12.44 vs 3 889.80±11.03）。circ0025847通过促进QK1表达抑制结直肠癌细胞的增殖。结论 circ0025847通过正调控QK1表达来抑制结直肠癌细胞的增殖, circ0025847可能是治疗结直肠癌的潜在作用靶点。