高糖通过Rho/ROCK信号通路诱导人肾小球系膜细胞的炎症反应及纤维化

摘要

目的探讨Rho/ROCK信号通路在高糖诱导的人肾小球系膜细胞（HMCs）炎症反应及纤维化中的作用。方法将传代培养的HMCs同步化后分组:（1）正常糖浓度对照组（NG,5.5mmol/L葡萄糖）;（2）高糖组（HG,30mmol/L葡萄糖）;（3）甘露醇渗透压对照组（Man,5.5mmol/L葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇）;（4）NG+Y-27632（10μmmol/L）组;（5）HG+Y-27632（10μmmol/L）组,培养12、24、36、48、72h后收集上清及细胞,用Western印迹检测RhoA蛋白的活化,用实时PCR检测细胞中RhoA、ROCK-Ⅰ、结缔组织生长因子（CTGF）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）mRNA浓度的变化,用ELISA方法检测上清中纤维连接蛋白（FN）、CTGF、TNF-α的蛋白含量。结果 （1）高糖刺激HMCs的RhoA活化,于30min即可出现活性升高,1h达到高峰,之后活化的RhoA表达逐渐下降（P=0.02）。（2）高糖培养下的HMCsRhoA、ROCK-Ⅰ、CTGF、TNF-αmRNA的表达较NG组明显升高（P＜0.05）,并有一定的时间依赖性,Man组与NG组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。（3）经Y-27632预处理后,在正常糖和高糖浓度培养24h或48h后,NG+Y-27632组和HG+Y-27632组与未处理组相比RhoA、ROCK-I、CTGF、TNF-αmRNA的表达明显下降（P＜0.01）。（4）高糖呈时间依赖方式增加HMCs的FN、CTGF、TNF-α分泌（P＜0.05）。（5）经Y-27632预处理,继续培养12、24、36、48、72h后NG组和HG组中FN、CTGF、TNF-α蛋白的分泌较处理前明显降低（P＜0.05）。结论高糖可通过Rho/ROCK信号通路介导HMCs的炎症反应和纤维化,抑制此通路可作为减缓糖尿病肾病发生发展的潜在靶点。