miR-181a-5p靶向LRRFIP1基因介导高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡及炎症反应

摘要

目的:探讨微小RNA-181a-5p(miR-181a-5p)靶向富含亮氨酸的重复失速相互作用蛋白1(LRRFIP1)基因介导高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡及炎症反应的分子机制.方法:体外培养小鼠肾小球系膜细胞SV40MES13,30 mmol/L高糖处理肾小球系膜细胞建立细胞损伤模型.实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测miR-181a-5p、LRRFIP1的表达量.分别将miR-181a-5p mimics、miR-NC、si-LRRFIP1、si-NC、pcDNA-LRRFIP1与miR-181a-5p mimics、pcDNA-NC与miR-181a-5p mimics转染至肾小球系膜细胞,使用含有30 mmol/L高糖培养基培养细胞.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶实验检测miR-181a-5p过表达对野生型和突变型LRRFIP1荧光素酶活性的影响;Western blot检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-caspase-3)表达量.结果:高糖处理后,miR-181a-5p的表达水平显著降低(P<0.05),LRRFIP1的表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平显著降低(P<0.05),TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著升高(P<0.05);miR-181a-5p过表达或抑制LRRFIP1表达后,细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平显著升高(P<0.05),TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著降低(P<0.05);双荧光素酶实验结果证实miR-181a-5p能够抑制LRRFIP1的3'-UTR区荧光素酶活性(P<0.05);与miR-181a-5p+pcDNA-NC+HG组相比,miR-181a-5p+pcDNA-LRRFIP1+HG组细胞凋亡率显著降低(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平显著降低(P<0.05),TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著升高(P<0.05).结论:miR-181a-5p靶向干扰LRRFIP1的表达从而促进高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡,降低炎症反应.