骨保护素、核因子-κB受体活化因子配基在氟砷联合染毒大鼠骨骼毒性中的调控作用

摘要

目的探讨骨保护素（OPG）与核因子-κB受体活化因子配基（RANKL）在氟砷联合染毒大鼠骨骼毒性中的调控作用。方法选取192只8周龄清洁级Wistar大鼠,体重为（200±50）g,根据2×4析因实验设计按体重采用随机数字表法分成16组,每组12只,雌雄各半。用氟化钠（NaF,空白对照0.0 mg/kg、低氟5.0mg/kg、中氟10.0 mg/kg、高氟20.0 mg/kg）和亚砷酸钠（NaAs02,空白对照0.0 mg/kg、低砷2.5 mg/kg、中砷5.0mg/kg、高砷10.0mg/kg）灌胃染毒6个月。依据上述处理因素将大鼠分为对照组（F0As0）、低氟组(F5.0As0)、中氟组(F10.0As0)、高氟组(F20.0As0)、低砷组(F0As2.5)、中砷组(F0As5.0)、高砷组(F0As10.0)、低氟低砷组(F5.0As2.5)、低氟中砷组(F5.0As5.0)、低氟高砷组(F5.0As10.0)、中氟低砷组(F10.0As2.5)、中氟中砷组(F10.0As5.0)、中氟高砷组(F10.0As10.0)、高氟低砷组(F20.0As2.5)、高氟中砷组(F20.0As5.0)、高氟高砷组(F20.0As10.0)。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA法）检测大鼠骨组织中OPG及RANKL蛋白表达水平,实时荧光定量PCR法检测OPG及RANKLmRNA表达水平。结果与F0As0组[（2.678±0.136）ng/mg、（29.658±0.662）pg/mg]比较,F5.0As0、F10.0As0、F20.0As0组骨组织中OPG[（2.857±0.162）、（2.983±0.272）、（3.117±0.143）ng/mg]、RANKL[（32.533±0.999）、（32.698±1.932）、（33.331±1.140）pg/mg]蛋白表达水平随染氟剂量的升高均有升高趋势;与F0As0组比较,F0As2.5、F0As5.0、F0As10.0组骨组织RANKL蛋白水平[（32.348±2.838）、（31.589±1.359）、（28.843±1.908）pg/mg]随染砷剂量的升高而先升高后下降（P均＜0.05）。与FoAso组（0.83±0.19、0.92±0.23）比较,F5.0As0、F10.0As0、F20.0As0组骨组织OPG（1.14±0.27、1.33±0.39、1.69±0.77）、RANKL mRNA水平（1.02±0.21、1.17±0.15、1.25±0.31）随染氟剂量的升高均有升高趋势。氟对OPG、RANKL蛋白和mRNA的表达有主效应（F=11.530、21.765、6.320、3.543,P均＜0.05）,氟砷联合对RANKL蛋白和mRNA、OPG蛋白表达存在交互拮抗作用（F=9.496、2.217、3.375,P均＜0.05）。结论氟砷联合染毒对大鼠骨组织RANKL及OPG的影响中氟起主导作用,砷间接参与了氟致大鼠骨骼毒性作用,氟砷联合对OPG及RANKL表达的交互作用主要表现为拮抗作用。