胃泌素对结肠癌细胞中粘着斑激酶通路下游E-钙粘蛋白/β-连环蛋白复合物的影响

摘要

目的 探讨胃泌素对结肠癌细胞CoLo320WT中粘着斑激酶(FAK)通路下游E-钙粘蛋白/β-连环蛋白(E-cadherin/β-catenin)复合物分布的影响;方法脂质体转染表达胃泌素受体CCK-2R的pCR3.1/GR质粒于结肠癌细胞CoLo320中,G418筛选出稳定表达CCK-2R的阳性克隆,RT-PCR鉴定,转染成功命为CoLo320WT.应用10-8 mmol/L胃泌素(G17)以时间梯度(0 h、1 h、6 h、12 h、24 h、48 h)干预CoLo320WT细胞,同时应用10-6 mmol/L胃泌素受体拮抗剂L365,260干预CoLo320WT细胞30 min,再予10-8 mmol/L胃泌素干预.采用免疫印迹法检测磷酸化的FAK Tyr397和总FAK的表达.采用免疫共沉淀和免疫印迹法检测CoLo320WT中TX-100溶解和未溶部分中的E-钙粘蛋白和β-连环蛋白的表达.用免疫细胞化学法观察E-钙粘蛋白和β-连环蛋白的在胞膜、胞质和胞核的分布.结果 随着胃泌素干预时间的延长,细胞中磷酸化的FAK Tyr397的表达量呈增加趋势,12 h达最大值.胃泌素受体拮抗剂L365,260阻断后磷酸化的FAK Tyr397表达减少.而胃泌素对总FAK没有明显影响.TX-100可溶性部分中E-钙粘蛋白和β-连环蛋白的量在胃泌素干预后表达减少,拮抗剂L365,260阻断后又增加.而TX-100不溶解部分中表达却相反.免疫细胞化学观察到在胃泌素于预下CoLo320WT细胞中E-钙粘蛋白和β-连环蛋白的分布发生胞质和胞核转移.结论 胃泌素与其受体CCK-2受体结合,磷酸化的FAK Tyr397、激活FAK通路进而影响结肠癌细胞中E-钙粘蛋白和β-连环蛋白的分布,促进结肠癌细胞侵袭和转移.