腺病毒介导肝癌抑制基因-1联合5-氟尿嘧啶增强结直肠癌细胞杀伤作用及机制研究

摘要

目的通过化学治疗药物5-氟尿嘧啶（5-FU）联合重组腺病毒（Ad）肝癌抑制基因-1（HCCS1）感染结直肠癌细胞,观察两者对结直肠癌细胞的联合杀伤作用,并初步探讨相关分子机制。方法 RT-PCR和Western印迹法检测Ad-HCCS1感染结直肠癌LoVo细胞后HCCS1的表达。活细胞计数试剂盒（CCK）-8法测定Ad-HCCS1联合5-FU处理时的细胞存活率。流式细胞仪检测各种处理后细胞凋亡的情况。Western印迹法检测各种处理后相关凋亡蛋白的变化。结果①Ad-HCCS1可成功介导HCCS1基因在LoVo细胞中的表达。②5-FU+Ad-HCCS1联合作用96h时,LoVo细胞存活率为（11.23±4.61）%,与对照组比较差异有统计学意义[（92.23±3.77）%,P＜0.01]。③处理72 h后流式细胞仪分析结果显示,5-FU+Ad-HCCS1联合组细胞凋亡率为（27.57±1.78）%,高于单用5-FU组[（8.64±0.94）%]、单用Ad-HCCS1组[（13.19±1.32）%]和5-FU+空载病毒组[（12.16±1.28）%],差异均有统计学意义（P值均＜0.01）。④在Ad-HCCS1感染LoVo细胞高表达HCCS1时,胞质蛋白中检测到组织蛋白酶（cathepsin）D;当5-FU加入后,胞质中的抗凋亡蛋白酶前体（procaspase）-8有所减少,而活性BH3结构域凋亡诱导蛋白（Bid）明显增加。在5-FU+Ad-HCCS1处理组,胞质中的Bax水平降低最为明显,而细胞色素C和活性凋亡蛋白酶（caspase）-3表达最多。结论在5-FU基础上联合Ad-HCCS1可显著增强LoVo细胞的生长抑制和凋亡诱导,两种处理的联合作用点为Bax蛋白,为结直肠癌治疗提供了一种新策略。