非酒精性脂肪性肝病小鼠肝锌指蛋白A20的表达与多烯磷脂酰胆碱的干预效果

摘要

目的探讨非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）锌指蛋白A20的表达与多烯磷脂酰胆碱（PPC）对NAFLD的影响。方法以10、20、40、80、160μmol/L PPC预处理HepG2细胞后24 h,联合0.25 mmol/L游离脂肪酸（FFA）共同孵育24 h,同时设立空白组和0.25 mmol/L FFA组。将28只6周龄、雄性C57BL/6小鼠分为野生组（8只）、甲硫氨酸胆碱缺乏（MCD）组（10只）、PPC组（10只）。野生组常规饲养,MCD与PPC组予MCD饲养,PPC组同时予PPC灌胃。饲养6周处死,采血并取肝脏组织检测HepG2细胞、肝组织锌指蛋白A20的表达与血清生物化学、脂代谢指标和相关炎性因子水平。统计学比较采用两样本均数t检验和Kruskal-Wallis检验。结果与空白组相比,0.25 mmol/L FFA组HepG2细胞锌指蛋白A20表达增强[（5.03±0.12）%比（25.75±0.47）%],差异有统计学意义（t=73.19,P＜0.01）,TG、IL-8含量增加[分别为（0.08±0.00）mmol/L比（0.41±0.01）mmol/L;（41.90±1.60）pg/mL比（55.51±1.07）pg/mL],差异均有统计学意义（t=40.67、12.25,P均＜0.01）。与0.25 mmol/L FFA组相比,0.25 mmol/L FFA联合40μmol/L PPC时,HepG2细胞锌指蛋白A20表达[（35.39±0.54）%]开始增强（t=23.25,P＜0.01）;联合80、160μmol/L PPC时HepG2细胞内TG[分别为（0.18±0.01）、（0.13±0.01）mmol/L,t=27.36、33.97]、IL-8[分别为（10.62±0.50）、（9.53±0.36）pg/mL,t=66.10、70.63]表达均下降,差异均有统计学意义（P均＜0.01）。MCD组和PPC组小鼠肝组织内锌指蛋白A20表达呈双条带,表达均较野生组增强[分别为（2.10±0.43）%、（1.56±0.96）%、（0.89±0.55）%],差异有统计学意义（t=5.20、2.55,P均＜0.05）;病理见脂肪变、气球样变、小叶炎性反应。与MCD组相比,PPC组锌指蛋白A20表达减弱,差异有统计学意义（t=2.63,P＜0.05）;病理见脂肪变、小叶炎性反应、肝细胞坏死减轻。与野生组小鼠相比,MCD组血ALT[（44.05±12.46）U/L比（126.93±52.73）U/L]、AST[（138.46±43.49）U/L比（276.14±134.88）U/L]和肝内FFA[（1.04±0.33）mmol/L比（1.60±0.32）mmol/L]、肝内TG[（0.40±0.12）mmol/L比（0.87±0.41）mmol/L]水平较高,差异均有统计学意义（t=4.81、3.04、3.65、3.39,P均＜0.05）,血TG[（0.44±0.16）mmol/L比（0.10±0.04）mmol/L]和TC[（2.11±0.19）mmol/L比（0.61±0.12）mmol/L]水平较低,差异均有统计学意义（t=5.94、20.45,P均＜0.01）。与MCD组相比,PPC组血FFA[（0.77±0.34）mmol/L比（0.42±0.19）mmol/L]和ALT[（126.93±52.73）U/L比（79.27±70.74）U/L]水平较低（t=2.89、2.71,P均＜0.05）,肝内TC[（0.67±0.10）mmol/L比（0.94±0.22）mmol/L]和血TC[（0.61±0.12）mmol/L比（1.69±0.25）mmol/L]水平较高（t=3.41、12.08,P均＜0.01）,其余指标比较差异均无统计学意义（P均＞0.05）。野生组、MCD、PPT组血炎性因子比较差异均无统计学意义（P均＞0.05）。结论PPC能改善肝内脂肪变和炎性反应,锌指蛋白A20可能是NAFLD防治的作用靶点之一。