二甲双胍对非酒精性脂肪性肝病细胞模型内质网应激与自噬的影响

摘要

目的 观察二甲双胍对游离脂肪酸(FFA)诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)HepG2细胞模型内质网应激(ERS)及自噬的影响.方法 2020年7—11月于武汉大学人民医院消化系统疾病湖北省重点实验室进行实验.分别用0(空白对照)、10、20、40、80 mmol/L的二甲双胍处理HepG2细胞24 h,评估二甲双胍对细胞活力的影响.取对数生长期HepG细胞分为对照组(BSA组)、模型组(FFA组)、二甲双胍低浓度组(Met L组)、二甲双胍高浓度组(Met H组)4组,FFA、Met L、Met H组利用FFA处理HepG2细胞24 h建造NAFLD细胞模型,Met L、Met H组分别加入1 mmol/L和10 mmol/L二甲双胍干预其过程.Western-blot法分别检测HepG2细胞ERS相关蛋白磷酸化PERK(p-PERK)、ATF4及自噬相关蛋白p62、LC3表达水平的变化,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测ATF4 mRNA表达.结果 二甲双胍可剂量依赖性地降低HepG2细胞活力(F/P=1759.000/0.000).与BSA组比较,FFA组内p-PERK、p62、ATF4蛋白和mRNA表达水平增高(t/P=3.273/0.029、16.190/0.000、47.290/0.000、13.730/0.000),LC3Ⅱ/Ⅰ比值下降(t/P=17.980/0.000);与FFA组比较,Met L组和Met H组p-PERK、p62、ATF4蛋白和mRNA表达水平降低(F/P=70.310/0.000、106.700/0.000、995.600/0.000、66.960/0.000),LC3Ⅱ/Ⅰ比值升高(F/P=166.400/0.000),且与Met L组比较,Met H组上述指标变化更明显(P0.05).结论 二甲双胍可降低FFA诱导的NAFLD细胞模型ERS水平并提高细胞自噬水平.