蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体放射配体检测法的建立与临床应用

摘要

目的建立蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体(IA-2A)的放射配体测定法. 方法经试管内转录与翻译,获得35S 标记的重组人IA-2抗原.35S-IA-2与血清在自制旋转孵育器上混匀过夜,用蛋白A-琼脂糖沉淀抗原抗体复合物.沉淀复合物经TBST缓冲液洗涤后,置液体闪烁计数仪计数,结果以IA-2A指数表示.并检测国人111例1型和113例2型糖尿病患者,以及125名健康志愿者的IA-2A水平,评价其敏感性、特异性及临床应用价值. 结果该方法的批内变异系数(CV)3.2%～9.7%,批间CV 5.6%～11.7%;DASP 2003回报结果显示其敏感性64%,特异性100%;该方法检测45份标本的IA-2A指数与国际标准化实验室结果呈显著正相关(r=0.690,P＜0.01),且阴、阳性判断完全一致; IA-2A指数阳性阈值0.0065(为125名健康者的99.5%百分位点上限);该方法检测国人1型糖尿病患者阳性率23.4%(26/111),其中病程＜1年的阳性率33.3%(17/51),病程≥1年的阳性率15.0%(9/60),差异有显著意义(χ2=5.17,P＜0.05).2型糖尿病患者阳性率1.8%(2/113), 显著低于1型糖尿病患者(χ2=24.0,P＜0.001). 结论建立的IA-2A放射配体检测法灵敏、特异性和重复性好,可望广泛临床应用.