微RNA-125a靶向白细胞介素23受体信号通路抑制HaCaT细胞增殖机制的初步研究

摘要

目的 探讨微RNA(miR)-125a抑制角质形成细胞增殖的相关机制.方法 用白细胞介素(IL)-23干预处理人永生化角质形成细胞(HaCaT)24h后,分为miR-125a组和miR-NC组,分别转染miR-125a过表达质粒和过表达对照质粒.采用细胞计数试剂盒(CCK8)法检测两组转染后0、24、48、72 h HaCaT细胞增殖能力,采用实时荧光定量PCR检测转染后24h两组miR-125a及IL-23受体(IL-23R)mRNA的表达,采用Western印迹法测定两组转染后48 h IL-23R、Janus激酶2(JAK2)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化AKT(p-AKT)的表达.采用双荧光素酶报告实验验证miR-125a和IL-23R间的靶向关系.两组间均数比较采用t检验,HaCaT细胞增殖能力随时间的变化采用重复测量方差分析法评估.结果 质粒转染后,miR-125a组miR-125a相对表达水平(6.377±0.745)高于miR-NC组(0.700±0.222),差异有统计学意义(t=7.305,P=0.002).转染后0、24、48 h,miR-125a组与miR-NC组细胞增殖能力差异无统计学意义(t值分别为0.663、0.623、1.930,均P＞0.05);转染后72 h,miR-125a组细胞增殖能力显著低于miR-NC组(t=4.407,P＜0.05).MiR-125a组IL-23R mRNA表达水平显著低于miR-NC组(t=3.082,P＜0.05).与miR-NC组相比,miR-125a组IL-23R、JAK2和p-AKT蛋白表达量均降低,差异有统计学意义(t值分别为11.715、6.996、12.424,P值分别＜0.001、=0.002、＜ 0.001).双荧光素酶报告实验显示,miR-125a可靶向结合IL-23R.结论 MiR-125a可能通过负性靶向调控IL-23R/JAK2/AKT信号通路抑制角质形成细胞的增殖.