人ODCmRNA反义抑制敏感位点的筛选

摘要

目的:为建立有效的肿瘤治疗方法,筛查ODC mRNA最佳反义抑制位点.方法:采用RT-PCR的方法从肝癌细胞中扩增出鸟氨酸脱羧酶(ODC),外显子2、外显子3、外显子6-10、外显子11-12 4段基因片段.通过TA克隆反向连接到pcDNA3.1上,酶切测序并鉴定插入方向.脂质体法转染重组载体及空载体到肝癌MMC7721细胞中,采用Western-blot法检测各载体对ODC蛋白表达的抑制作用,采用四唑盐比色试验验证并比较各载体对MMC7721细胞增殖活性的影响.结果:外显子2、外显子3、外显子6-10 3个位点的ODC反义RNA表达载体转染细胞后,细胞内ODC蛋白表达量明显降低,细胞增殖活性受到明显抑制,抑制率分别为59%、62%、64%.结论:ODC外显子2、外显子3、外显子6-10是较好的反义抑制敏感位点.