NF-κB在NGF和TNF-α对Aβ25～35海马神经细胞毒的保护作用中的机制研究

摘要

目的研究神经生长因子(NGF)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对β-淀粉样蛋白25～35(Aβ25～35)诱导海马神经细胞凋亡的保护作用,探讨核转录因子-κB(nucleartranscription factor,NF-κB)在此过程中的可能机制.方法通过体外SD大鼠海马原代细胞培养,采用TUNEL和Annexin V染色法观察Aβ25-35诱导的细胞凋亡;采用MTT法观察细胞存活率,以及采用Westem Blot法检测NF-κB p65蛋白的表达.结果大鼠海马神经细胞经Aβ25～35 10mg/L孵育48h后,TUNEL染色显示神经细胞核多呈绿色荧光着色,提示细胞凋亡,而对照组未见荧光着色;Annexin V染色海马神经细胞膜亦多呈绿色荧光着色,但细胞核未着色,对照组则无荧光着色.MTT检测显示,NGF组和TNF-α组神经细胞存活率均较Aβ组明显增加(P＜0.05);经NF-κB抑制剂SN50预处理后,NGF组和TNF-α组神经细胞存活率与Aβ组相比,差异无显著性意义(P＞0.05).Western Blot法检测显示,NGF组和TNF-α组的海马神经细胞NF-κBp65蛋白表达明显增加.当NGF和TNF-α的浓度为10μg/L时,均对Aβ25-35的海马神经细胞毒具有保护作用.经NGF和TNF-α处理后,NF-κB活性增加;当给予18mol/LSN50抑制NF-κB活性后,NGF和TNF-α对海马神经细胞的保护作用减弱(P＞0.05).结论体外原代海马神经细胞培养结果表明,Aβ2β25-35可诱导神经细胞凋亡;NGF和TNF-α均对Aβ25～35的神经细胞毒具有保护作用,NF-κB可能参与了这种保护机制.