微小RNA-876-3p靶向肽基脯氨酰顺反异构酶A调控胃癌细胞增殖和顺铂耐药性的作用机制研究

摘要

目的研究微小RNA-876-3p(miR-876-3p)通过调控肽基脯氨酰顺反异构酶A(PPIA)对胃癌细胞增殖和顺铂(DDP)耐药性的影响。方法体外培养胃癌细胞MKN28,用低浓度梯度递增方法诱导MKN28细胞形成顺铂耐药性,以构建顺铂耐药细胞株(MKN28/DDP)。MKN28和MKN28/DDP细胞各包含4个实验组:阴性对照组、第1转染组(转染si-PPIA)、第2转染组(转染miR-876-3p mimics)和第3转染组(转染si-PPIA+miR-876-3p inhibitor)。用顺铂1μg·mL^-1处理各组MKN28细胞,用顺铂5μg·mL^-1处理各组MKN28/DDP细胞,培养24 h。以实时荧光定量-PCR法检测各组细胞中miR-876-3p表达水平,蛋白质印迹法检测各组细胞中PPIA蛋白的表达水平,细胞计数试剂盒法检测各组细胞增殖活力,流式细胞术检测各组细胞细胞凋亡水平。结果miR-876-3p在正常胃上皮细胞GES-1、胃癌细胞MKN28和MKN28/DDP中的相对表达量分别为1.01±0.21,0.41±0.15和0.32±0.11,MKN28与GES-1比较,差异有统计学意义(P<0.01);MKN28/DDP与MKN28比较,差异有统计学意义(P<0.05)。在表达miR-876-3p实验中,1μg·mL^-1顺铂处理MKN28,阴性对照组和第3转染组的细胞活力分别为(1.00±0.04)%,(0.65±0.03)%;这2组的细胞凋亡率(41.87±1.65)%,(68.98±4.12)%。5μg·mL^-1顺铂处理MKN28/DDP,阴性对照组和第3转染组的细胞活力分别为(1.01±0.02)%,(0.72±0.05)%;这2组的细胞凋亡率分别为(34.66±0.94)%,(56.71±3.03)%,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-876-3p可靶向结合PPIA。以1μg·mL^-1顺铂处理MKN28细胞,阴性对照组、第1转染组和第3转染组的细胞活性分别为(1.01±0.03)%,(0.58±0.04)%和(0.97±0.02)%;这3组的细胞凋亡率分别为(39.96±2.01)%,(71.12±2.98)%和(45.14±2.47)%。以5μg·mL^-1顺铂处理MKN28/DDP细胞,这3组的细胞活性分别为(1.01±0.04)%,(0.63±0.06)%和(0.94±0.05)%;这3组的细胞凋亡率分别为(31.95±1.31)%,(62.88±5.63)%和(36.84±2.11)%。上述指标:第1转染组与阴性对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);第3转染组与第1转染组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论过表达miR-876-3p可明显上调胃癌细胞对顺铂的敏感性,其机制是通过靶向下调PPIA的表达从而降低胃癌细胞增殖、增加其凋亡。