黏着斑激酶抑制剂Y15对中心静脉导管联合5-氟脲嘧啶诱导的细胞氧化损伤的作用机制研究

摘要

目的研究抑制黏着斑激酶(FAK)-蛋白激酶B(Akt)信号通路活化在减轻中心静脉导管(CVC)联合5-氟脲嘧啶(5-FU)诱导的血管内皮细胞氧化性损伤中的作用及其机制。方法将EA.hy926细胞随机分为3组:正常组、模型组和实验组,每组3个时间点:24,48,72 h,每个时间点8个复孔。模型组(CVCs+划痕+5-FU),细胞划痕后,放入截好的CVC节段3个,再加入5-FU(40μg·mL^-1),建立EA.hy926细胞氧化损伤模型;实验组在模型组基础上加入FAK抑制剂(Y15,50μmol·L^-1)。以噻唑蓝比色法检测各时间点(24,48,72 h)细胞活性(OD值),以2,7-二乙酸二氯荧光素检测细胞活性氧(ROS)水平,硝酸还原酶法测定细胞培养液中一氧化氮(NO)含量,以蛋白质印迹法检测细胞中p-FAK Tyr 397和p-Akt Ser 473的表达水平(灰度值)。结果干预72 h后,正常组、模型组和实验组的细胞存活率分别为(94.80±3.27)%,(50.20±3.96)%和(71.00±2.92)%;这3组的ROS相对水平分别为(98.82±6.63)%,(469.83±19.60)%和(178.01±11.49)%;这3组的NO含量分别为(59.33±2.44),(22.10±2.57)和(43.39±2.58)μmol·L^-1;这3组的p-FAK Tyr 397相对表达水平为0.19±0.02,1.27±0.04和0.88±0.01;这3组的p-Akt Ser 473相对表达水平为0.14±0.02,1.17±0.04和1.05±0.09。上述指标:正常组与模型组比较、或实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.001)。结论抑制黏着斑激酶-蛋白激酶B信号通路活化能够减轻CVC联合5-FU诱导的EA.hy926细胞氧化损伤。