结核分枝杆菌ESAT-6蛋白免疫优势肽段的重组表达、纯化与鉴定

摘要

目的 构建结核分枝杆菌(MTB)ESAT-6免疫优势肽段(ESAT-6P)的基因表达工程菌,以获得大量重组肽段.方法 根据编码ESAT-6P的MTB基因序列,设计1对特异引物,通过PCR技术从H37Rv基因组DNA扩增出ESAT-6P编码基因,目的片段克隆到原核表达载体Pet-30a中,构建N端带有6His-tag的表达载体.将重组表达载体转化E. Coli BL21(DE3)后,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析表达产物,斑点免疫结合法(DIBA)鉴定重组肽段的免疫反应性.结果 成功诱导表达ESAT-6蛋白的免疫优势肽段,与表达载体氨基酸序列融合后,表达产物相对分子质量约为16 500,该重组肽段以包涵体形式存在.DIBA结果表明,该重组肽段可被结核患者血清特异识别.结论 获得MTB ESAT-6免疫优势肽段的基因表达工程菌,为将此重组肽段应用于结核诊断试剂和新型疫苗的研制奠定了基础.