建立基于gyrB基因检测结核分枝杆菌复合物的荧光定量PCR法

摘要

目的 建立基于gyrB基因扩增检测结核分枝杆菌复合物(MTC)的荧光定量PCR(FQ-PCR)法.方法 根据gyrB基因设计合成引物和探针,建立并评价TaqMan探针FQ-PCR法,并与基于IS6110序列的FQ-PCR法分别检测50例临床标本,比较两种方法的检测结果.结果 建立的FQ-PCR法标准曲线方程为Y=-3.18X+42.84,相关系数(r2)为0.995、扩增效率为106.25％,其检测灵敏度为102 CFU/mL; MTC中结核分枝杆菌和非洲分枝杆菌阳性,其他分枝杆菌和4株临床其他细菌均为阴性.批内及批间变异系数(CV)均＜2％,重复性良好.本法与基于IS6110序列的FQ-PCR法对50例临床标本的检测结果差异无统计学意义(x2=0.06,P＞0.05),一致性好(κ=0.94).结论 基于gyrB基因扩增的FQ-PCR法灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于结核分枝杆菌复合物的早期快速诊断.