膜联蛋白5刺激大鼠Leydig细胞增殖过程中RhoA、Rock Ⅰ的表达

摘要

目的 研究RhoA、Rock Ⅰ促进大鼠Leydig细胞增殖的机制,探讨膜联蛋白5调控Leydig细胞增殖的新途径.方法 用1 nmol/L膜联蛋白5处理原代培养大鼠Leydig细胞12、24、48 h后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,western blot检测RhoA和Rock Ⅰ的蛋白质表达情况.结果 MTT法结果显示,1 nmol/L膜联蛋白5呈显著的时间依赖的促进Leydig细胞增殖作用,且24h组细胞增殖能力与对照组差异最为显著(0.251 ±0.019 vs 0.207±0.009,t=4.380,P＜0.01);流式细胞分析发现,1 nmol/L膜联蛋白5作用于Leydig细胞,以作用24 h时对细胞周期的影响最为显著,可使G2+M期比例比对照组升高(12.24±0.84 vs 7.79±1.15,t =5.407),G0/G1期比例下降(67.61±0.37 vs 74.49±0.73,t=-14.64),P均＜0.01;western bolt结果表明,膜联蛋白5作用12、24、48 h后Leydig细胞RhoA表达结果分别为1.39±0.29、2.21±0.38、1.46±0.19,与0h组结果0.89±0.41比较,均有升高(t=2.028,P＜0.05;t=4.736,P＜0.01;t =2.550,P＜0.05);膜联蛋白5作用24、48 h后Leydig细胞Rock Ⅰ表达结果分别为1.14±0.18、1.03±0.17,与0h组结果0.72±0.22比较均升高(=2.944,P＜0.01;=2.246,P＜0.05).结论 RhoA、Rock Ⅰ可能参与膜联蛋白5促进细胞周期G0/G1进程,最终促进Leydig细胞的增殖.