流式细胞仪分选侧群细胞条件的探索与优化

摘要

目的 探讨不同浓度的荧光染料(Hoechst 33342)和抑制剂维拉帕米(verapamil)对流式细胞仪分选侧群(SP)细胞的影响.方法 实验分为Hoechst 33342组(Hoechst 33342浓度分别为2.5、5.0和7.5 μg/mL)和抑制组(Hoechst 33342+ verapamil,verapamil浓度分别为50、100和150 μmol/L),用流式细胞仪分选人肺腺癌细胞系A549中SP细胞,摸索Hoechst 33342和verapamil的最佳浓度,并用本实验室构建的一株肿瘤细胞系K1进行验证.结果 在verapamil和Hoechst 33342浓度分别为150 μmol/L和7.5 μg/mL时,A549细胞染色充分,SP细胞亚群与非SP(non-SP)细胞亚群分群明显,SP细胞约为2.2％.K1细胞在verapamil为50 μmol/L和Hoechst 33342为5μg/mL时,SP细胞亚群与non-SP细胞亚群分群明显,SP细胞亚群可被verapamil抑制,其比例约为1.3％.分选后的SP细胞和non-SP细胞可进一步扩增培养.结论 Hoechst 33342和verapamil可影响肿瘤细胞中SP细胞分选效率.