miRNA-29a在卡介苗处理的U937巨噬细胞中的表达及基因调控研究

摘要

目的分析结核分枝杆菌感染情况下,U937巨噬细胞中miRNA-29a的表达变化及基因的表达调控,揭示miRNA-29a在结核发生发展中的作用机制。方法利用miRnada、RNAhybrid和targetscan软件对miRNA-29a的靶基因进行预测。采用卡介苗菌株感染佛波酯（PMA）诱导分化的U937巨噬细胞,提取RNA,逆转录为cDNA。采用实时荧光定量PCR检测miRNA-29a及其靶基因表达水平,并通过构建miRNA-29a过表达和低表达的U937巨噬细胞系,检测miRNA-29a水平及其靶基因的表达水平。采用SPSS 18.0统计软件对数据进行分析。结果 miRNA-29a调控VEGFA、NFATC3和TSC22D3基因等表达。卡介苗菌株感染U937巨噬细胞后,miRNA-29a表达增加,为正常培养U937巨噬细胞的1.33倍（P＜0.05）,VEGFA、NFATC3及TSC22D3基因表达水平也显著升高,分别为正常培养U937巨噬细胞的5.34、99.25及2.12倍（P ＜0.01）。U937巨噬细胞经miRNA-29a模拟物转染后,VEGFA、NFATC3和TSC22D3基因表达水平分别上调至1. 35、1. 29和3. 38倍（P ＜0. 05或＜0. 01）,而U937巨噬细胞经miRNA-29a抑制剂转染后,VEGFA、NFATC3和TSC22D3基因表达水平分别下调至0.07、0.08和0.55倍（P＜0.01）。结论结核分枝杆菌感染可导致U937巨噬细胞miRNA-29a表达水平升高,进一步靶向调控VEGFA、NFATC3和TSC22D3基因表达增加,从而可能参与结核的发生发展。