粒细胞集落刺激因子对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

摘要

目的 探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖的影响及其在BMSC向神经元样细胞分化中的作用.方法 取16只SD大鼠的骨髓,体外培养BMSC,采用差速贴壁法分离细胞,并进行鉴定.按不同浓度给予G-CSF,分为四组(G0～3组),GO组不含G-CSF,设为阴性对照;G1～3组分别含G-CSF 5、10、20ng/ml,按1×105/ml密度接种于平底96孔培养板中(每孔100μl).MTT法测定各组加入G-CSF第1、3、5、7天吸光度(A值)的变化,观察G-CSF对BMSC增殖的影响.以碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预诱导24 h后,按神经胶质细胞衍化营养因子(GDNF)和不同浓度G-CSF组合分组(B1～5)进一步诱导,B1不含GDNF、G-CSF,镜下观察细胞形态变化.反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测神经细胞标记物GFR-α1的表达.结果 ①在给予G-CSF第1、3、5、7天,Co组A值呈下降趋势(F=23.5083,P<0.05),G1～3组内A值呈上升趋势(F1=202.5940,F2=1301.8815,F3=1222.0091,均P<0.05);同一时间点组间A值比较,G2、G3组较G1组增高(P<0.05),G2与G3组比较,差异无统计学意义(P>0.06).②B2～5组细胞逐渐变成圆形、多角形,伸出树突,并且均表达GFR-α1,而B1组无类似改变,也不表达GFR-α1.比较各诱导组在同一时间点(诱导第1、3、7天)组间灰度比值,B2～5组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 G-CSF能促进大鼠BMSC的增殖,其适宜浓度为10ng/ml.联用GDNF和适宜浓度的G-CSF,比单用GDNF能更有效地诱导BMSC分化为神经元样细胞.