大鼠骨髓基质干细胞起搏电流基因的表达及转染人HCN2的表达及鉴定

摘要

目的研究骨髓基质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）起搏电流基因的表达及转染人超极化激活的环化核苷酸门控通道（hyperpolarization-activated cyclic-nucleotide gated,HCN）亚型2后起搏电流的特点。方法通过实时定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chainreaction,real-time PCR）的方法,检测 MSCs 本身起搏电流基因的表达。用脂质体转染的方法,将重组有编码起搏电流基因的质粒 pcDNA3-hHCN2导入 MSCs 中,用全细胞膜片钳技术记录起搏电流(ⅠhHCN2);用 real-time PCR 和 Western blot 印迹检测目的基因 hHCN2的 mRNA 和蛋白表达。结果MSCs 起搏电流基因 mHCN1、mHCN2、mHCN3、mHCN4在总 HCN 的表达中所占比例分别为（0.08±0.01）%、（77.16±0.03）%、（0.24±0.01）%、（22.53±0.02）%。全细胞膜片钳技术记录到ⅠhHCN2得到电流密度一电压曲线,其激活电压约为-80 mV,此电流可以被4 mmol/L的 Cs+阻断。real-timePCR 检测有 hHCN2 mRNA 的高表达,Western blot 印迹检测有其蛋白的表达。结论 （1）MSCs 起搏电流基因表达以 mHCN2和 mHCN4为主;（2）通过脂质体转染法使 MSCs 成功表达ⅠhNCN2起搏电流,为抗心律失常基因治疗的研究奠定了基础。