骨形态发生蛋白2在人心脏瓣膜间质细胞体外钙化中的作用

摘要

目的建立人心脏瓣膜间质细胞体外钙化模型,并观察人骨形态发生蛋白2（BMP-2）在心脏瓣膜间质细胞钙化中的作用。方法体外培养人心脏瓣膜间质细胞后,将其分为2组:对照组在常规培养基础上,加用重组型人BMP-2蛋白;实验组在常规培养基础上加用钙化诱导剂,包括重组型人BMP-2蛋白、β甘油磷酸、L抗坏血酸和地塞米松。两组细胞均培养14 d,分别进行Von Kossa染色,并观察细胞钙化情况,建立心脏瓣膜间质细胞体外钙化模型。采用Western blot法检测两组细胞中细胞间黏附分子1、白细胞介素8、BMP-2和BMP-4的表达;采用ELISA法测定两组细胞分泌的BMP-2蛋白含量。结果对照组细胞结构清晰,呈梭形放射状生长,Von Kossa染色阴性;实验组细胞核颜色变深,可见颗粒状沉积物分布在细胞周围,Von Kossa染色阳性,可见钙化的细胞形成结节。实验组细胞中的细胞间黏附分子1、白细胞介素8、BMP-2和BMP-4表达均高于对照组（P均＜0.05）。细胞培养液上清中的BMP-2水平实验组为（92.5±4.9）pg/ml,对照组为（22.2±1.9）pg/ml,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论采用重组型人BMP-2、β甘油磷酸、L抗坏血酸和地塞米松可诱导体外培养的瓣膜间质细胞钙化,并发生炎症反应,其BMP-2的表达以及分泌均增加。