siRNA逆转乳腺癌细胞系MCF-7/ADR耐药

摘要

背景与目的:肿瘤的多药耐药性常导致乳腺癌化疗失败,多药耐药基因 1( multidrug resistance 1,mdr1)编码的 P 糖蛋白 (P-glycoprotein,P-gp)过度表达是重要的耐药机制.本研究拟探讨 siRNA抑制耐药乳腺癌细胞系 MCF-7/ADR mdr1基因表达的可行性.方法:选择耐阿霉素人乳腺癌细胞系 MCF-7/ADR及其敏感细胞系 MCF-7作为研究对象.将预先设计的 siRNA包装入质粒载体,然后转化质粒到大肠杆菌中,经过克隆、扩增、纯化后转染到 MCF-7/ADR细胞中,潮霉素筛选,流式细胞仪检测 P-gp的表达率,实时定量 PCR检测 mdr1基因的表达率,并对转染后的细胞作阿霉素耐药实验.结果:流式细胞仪检测结果显示, MCF-7/ADR细胞经特异性 siRNA作用后, P-gp的表达率由 99 8%下降到 12 3%.实时相对定量 PCR检测结果显示, MCF-7/ADR细胞经特异性 siRNA作用后其 Ct值由 25 22增加到 30 64.阿霉素耐药实验显示,转染 siRNA 的 MCF-7/ADR细胞 IC50为 0 51 μ mol/L,而未转染组的 IC50为 17 88 μ mol/L.结论: siRNA能引发人乳腺癌多耐药细胞系 MCF-7/ADR内 mdr1基因沉默,从而为 siRNA作为一种可能的治疗手段提供了理论依据.