TrKA-siRNA抑制乳腺癌细胞系MCF-7 NF-κB的表达并促细胞凋亡

摘要

目的 探讨TrKA基因表达的变化对NF-κB P65核蛋白的表达和细胞凋亡的影响.方法 构建TrKA特异小于扰RNA(siRNA)表达载体,重组体经测序鉴定正确后转染乳腺癌MCF-7细胞.G418(geneticin)筛选稳定表达TrKAsiRNA干扰细胞株,命名为TrKA-siRNA.荧光实时定量RT-PCR、Western blot和免疫组化法检测TrKA基因和蛋白的表达,Western blot检测NF-κB P65核蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 成功构建TrKA-siRNA表达载体,TrKA mRNA和蛋白水平分别下调74.7%和80.5%(P<0.05).神经生长因子(NGF)作用2 h后,MCF-7组细胞NF-κB P65核蛋白表达明显增加,而TrKA-siRNA组细胞NF-κB P65核蛋白改变不显著.与McF-7组相比,TrKA-siRNA组细胞凋亡明显增加(P<0.05),NGF对其凋亡无促进作用.结论 有效阻断TrKA基因的表达能抑制NF-κB抗凋亡途径的活化,从而增加了乳腺癌MCF-7细胞的凋亡.此作用可能不依赖于外源性的NGF.