甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌临床分离株青霉素结合蛋白2a的克隆表达及鉴定

摘要

目的应用基因重组技术对编码甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA）临床分离株青霉素结合蛋白2a（PBP2a）的 mecA 基因片段进行克隆、表达。方法从临床样本中分离鉴定出 MRSA,根据基因文库收录的 mecA 基因编码序列,针对编码 PBP2a 第25～668位氨基酸的 mecA 基因片段设计引物,扩增目的基因片段,克隆至 pQE30载体,经酶切鉴定、测序后,再转化 E.coli M15（pREP4）。采用1 mmol/L 的异丙硫半乳摘苷（IPTG）进行诱导表达及鉴定。结果重组表达质粒 pQE30-mecA 构建成功,基因测序结果显示,扩增的 mecA 基因 DNA 片段全长为1932 bp,其中有9个碱基突变。IPTG诱导后6 h,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,M15（pQE30-mecA）出现一条相对分子质量约74×10~3的蛋白条带,且一部分以可溶性形式存在;M15（pQE30）未出现特异性蛋白条带。经诱导表达和鉴定证实,表达出的可溶性目的蛋白为 PBP2a。结论利用本技术可成功表达 MRSA 临床分离株中的可溶性PBP2a。