褪黑激素对增生性瘢痕成纤维细胞分泌转化生长因子β1的影响及其机制

摘要

目的研究褪黑激素对增生性瘢痕Fb分泌TGF-β1的影响及机制。方法采用组织块法分离培养人增生性瘢痕Fb,按随机数字表法将细胞分为褪黑激素组、褪黑激素+Luzindole（褪黑激素受体拮抗剂）组、Luzindole组和对照组（仅以细胞培养液培养）,前3组每孔细胞分别添加相应物质与细胞培养液培养,褪黑激素终浓度为1×10-3 mmol/L、Luzindole终浓度为1 mmol/L。每组10个复孔。培养24 h,采用ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1含量,实时荧光定量PCR检测细胞TGF-β1、Smad 7和Rho激酶（ROCK）mRNA表达。对数据进行单因素方差分析或LSD-t检验或Kruskal-Wallis检验,组间比较采用Nemneyi法。结果褪黑激素组Fb上清液中TGF-β1含量为（2.8±2.4）pg/mL,低于褪黑激素+Luzindole组的（23.9±2.7）pg/mL、对照组的（28.9±2.0）pg/mL和Luzindole组的（24.9±2.8）pg/mL（F=94.58,P＜0.05）。褪黑激素组细胞TGF-β1 mRNA表达量为11.9±1.2,明显低于其他组（F=20.79,P＜0.05）;褪黑激素+Luzindole组TGF-β1 mRNA表达量（14.9±1.8）与对照组（17.2±0.6）比较差异无统计学意义（t=0.806,P＞0.05）。褪黑激素组Fb Smad 7 mRNA表达量（0.076±0.080）明显高于对照组（0.023t0.024）、褪黑激素+Luzindole组（0.026±0.026）、Luzindole组（0.037±0.021）,x~2=9.567,P＜0.05。褪黑激素组ROCK mRNA的表达量明显低于对照组（0.002 30±0.002 70）、褪黑激素+Luzindole组（0.001 30±0.001 20）和Luzindole组（0.001 10±0.001 20）,x~2=9.420,P＜0.05。结论褪黑激素可通过与受体结合,上调瘢痕Fh中Smad 7表达、下调ROCK表达,从而抑制增生性瘢痕Fb表达TGF-β1。