自体脂肪源性基质血管成分局部移植对兔耳增生性瘢痕形成的影响及机制

摘要

目的探讨自体脂肪源性基质血管成分（SVF）局部移植对兔耳增生性瘢痕（HS）形成的影响及机制。方法取24只新西兰大耳白兔,于每只兔左耳腹侧面造成4个直径为1 cm的全层皮肤缺损创面,制作兔耳HS模型,观察创面上皮化情况及局部组织增生情况,记录创面愈合（完全上皮化）时间和HS形成时间。按随机数字表法将24只兔分为SVF组、单纯DMEM组和单纯HS组,每组8只兔、32个创面。于伤后25 d（创面完全上皮化后）,将0.2 mL含有CM-Dil标记的自体SVF的低糖DMEM培养液注射于SVF组兔HS,单纯DMEM组兔HS同前注射等量低糖DMEM培养液,每5天注射1次,共3次;单纯HS组兔HS不予任何处理。伤后40 d,取各组兔耳HS,行苏木素-伊红染色观察组织学形态,行Van Gieson染色观察胶原排列情况,荧光显微镜下观察HS中CM-Dil标记的SVF情况,实时荧光定量反转录PCR法和蛋白质印迹法分别检测HS中转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad3及Samd7的mRNA和蛋白表达情况。对数据行单因素方差分析、Tukey检验。结果 （1）兔耳创面完全上皮化时间为伤后（20.0±2.0）d;伤后25d,HS形成。伤后40 d,单纯DMEM组及单纯HS组兔耳HS仍保持增生状态,SVF组兔耳HS体积缩小、变平,质地变软,色泽稍变浅。（2）伤后40 d,与单纯DMEM组和单纯HS组比较,SVF组兔耳HS内上皮脚样结构较多,炎性细胞数量较少。SVF组兔耳HS胶原排列相对较规则,胶原之间间隙更大。（3）伤后40 d,SVF组兔耳HS仍可见CMDil标记的SVF。（4）伤后40 d,与单纯DMEM组和单纯HS组比较,SVF组兔耳HS中TGF-β1和Smad3的mRNA表达量明显下调（P ＜0.05）,Smad7的mRNA表达量明显上调（P ＜0.05）;单纯DMEM组与单纯HS组兔耳HS中TGF-β1、Smad3、Smad7的mRNA表达量无明显差异（P＞0.05）。（5）伤后40 d,与单纯DMEM组（0.74±0.03、0. 73±0. 10、0. 54±0.09）和单纯HS组（0.72±0.08、0. 71±0. 12、0.53±0.06）比较,SVF组兔耳HS中TGF-β1和Smad3的蛋白表达量（0.57±0.06、0.42±0.09）明显下调（P ＜0.05）,Smad7的蛋白表达量（0.71±0.05）明显上调（P ＜0.05）;单纯DMEM组与单纯HS组兔耳HS中的TGF-β1、Smad3、Smad7的蛋白表达量无明显差异（P＞0.05）,结论兔HS形成早期瘢痕内移植自体SVF可抑制HS形成,其机制可能与TGF-β1/Smad信号通路有关。