肠激酶在毕赤酵母中的分泌表达优化

摘要

肠激酶(Enterokinase,EK)是一类特异性识别切割DDDDK序列的丝氨酸蛋白酶,作为一种工具酶广泛应用于生物医药领域.目前,EK在毕赤酵母Pichia pastoris中的表达水平较低,难以应用.本研究比较了6种不同的信号肽SP1、SP2、SP3、SP4、SP7和SP8对毕赤酵母分泌表达EK的影响.在摇瓶水平上,与α-factor信号肽相比,SP1信号肽显著提高了EK的分泌表达(从6.8 mg/L提高至14.3 mg/L),酶活从(2 390±212) U/mL提高至(4 995±378) U/mL.在此基础上,通过共表达毕赤酵母内源蛋白Kex2,EK酶活提高至(7 219±489) U/mL.另外,N端融合WLR三个氨基酸进一步提高酶活至(15 145±920) U/mL,比酶活为(1 174 600±53 100) U/mg.EK在毕赤酵母中的高效分泌表达为未来应用奠定了基础.