人源抗ICAM-1单链抗体的制备及其生物学活性鉴定

摘要

利用噬菌体展示技术筛选特异性人源抗ICAM-1单链抗体(Anti-human ICAM-1 scFv)并进行生物学活性鉴定.应用Tomlinson I+J噬菌体抗体库,以P1抗原肽为包被抗原,经过4轮“吸附-洗脱-扩增”进行亲和富集筛选.以PCR反应、ELISA抗原交叉反应和Dot blotting实验进行阳性克隆的鉴定.scFv经原核表达和分离纯化后,以Western blotting实验、竞争ELISA实验和细胞黏附抑制实验对其生物学活性进行初步鉴定.Tomlinson I+J噬菌体抗体库经4轮亲和富集筛选,利用ELISA方法成功筛出4株阳性克隆.通过PCR鉴定反应、ELISA抗原交叉反应和Dot blotting实验,最终获得了1株既能与Pl抗原肽特异结合又能与人ICAM-1抗原特异结合的阳性克隆J-A1.对scFv进行原核表达和亲和层析后获得了高纯度的目的蛋白.竞争ELISA实验和细胞黏附抑制实验证实纯化的scFv具有良好的亲和活性和抗细胞黏附活性.文中成功利用噬菌体展示技术筛选到特异性人源抗ICAM-1 scFv,为进一步探索该抗体在炎症相关性疾病治疗中的应用奠定了基础.