柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库的构建

摘要

用建立表达性文库的方法,构建了Eimeriatenella孢子化卵囊噬菌体ZAP表达性cDNA文库.首先用TRlzol试剂盒从E.tenella孢子化卵囊中提取总RNA,再用Oligo(dT)12-纤维素柱从总RNA中分离mRNA,以mRNA为模板,Oligo(dT)18Linker-Primer为引物,反转录合成cDNA第一链,再在DNA聚合酶Ⅰ作用下置换合成第二链cDNA.cDNA第二链合成后用Pfu DNA聚合酶补平Xho Ⅰ位点,再与EcoR Ⅰ Adapters连接,经Xho Ⅰ酶切后,凝胶电泳回收500bp～4.0kp之间的cDNA片段,纯化后的双链cDNA与载体ZAP Express vector连接.体外包装后得到E.tenella孢子化卵囊的cDNA表达性文库,经测定该文库的容量为6×106,扩增后文库的滴度为1×1011Pfu/mL,经PCR测定,该文库的重组率为96%.