以新霉素抗性基因突变体为筛选标志的真核表达载体的构建

摘要

新霉素抗性基因(neo)是真核表达载体的常用筛选标志,neo基因编码新霉素磷酸转移酶Ⅱ(NPT Ⅱ),能催化G418、卡那霉素等多种氨基糖苷抗生素分子磷酸化而使之失去抗菌活性.通过对真核表达载体的筛选标志基因neo进行定点突变,以降低NPTⅡ的活性,然后用含neo突变体的真核表达载体pmDNA构建荧光素酶表达质粒,稳定转染CHO-K1细胞,发现表达荧光素酶的阳性细胞比例达到95%,其中高表达细胞集落的筛选率明显高于对照组.