由成年转基因山羊体细胞而来的克隆山羊

摘要

在已经获得的乳腺特异性表达人促红细胞生成素(rhEPO)成年转基因山羊(Capra hircus)的基础上,取其耳尖成纤维细胞和卵巢颗粒细胞,进行体外传代培养,然后将这种培养的转基因山羊的体细胞移人去核的处于第Ⅱ次减数分裂中期的卵母细胞中,并进行电融合,构建重构胚胎,重构胚胎在体内培养6d,再将发育至囊胚或桑椹胚的重构胚胎移入同步情期的寄母羊子宫内.结果,有2只寄母羊妊娠并最终产下2只成活的克隆山羊.她们分别来自同一成年母羊的耳尖成纤维细胞和卵巢颗粒细胞.克隆羊经PCR-RFLP图谱分析显示:以克隆羊组织DNA为模板的PCR产物与相应的提供体细胞的基因羊的PCR产物的酶切图谱完全一致;并且经PCR对外源hEPO基因检测表明2只克隆山羊均携带hEPO外源基因.由此证明获得了转基因成年体细胞的克隆山羊.