表达幽门螺杆菌黏附素保守区的减毒鼠伤寒沙门氏菌株的构建

摘要

为构建表达幽门螺杆菌(Hp)黏附素保守区(AB)的无抗性减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗,采用缺失腺苷酸环化酶基因(Δcya)、环腺苷酸受体蛋白基因(Δcrp)以及天冬氨酸β-半醛脱氢酶基因(Δasd)的鼠伤寒沙门菌(X4072)作为宿主,将编码AB的基因插入Asd+的组成型表达载体pYA248,通过两次转化引入宿主菌,构建了表达AB基因平衡致死的减毒鼠伤寒沙门重组菌X4072(pYA248-AB),采用桥联法ELISA测定X4072(pYA248-AB)培养上清液和裂解上清液中AB的抗原性,参照Meacock叙述的方法及重组菌生长曲线的测定来确定重组菌株的稳定性,通过C57BL/6小鼠口服测定半致死量来确定重组菌的安全性.成功构建了表达AB的减毒鼠伤寒沙门菌重组菌株S.typhimurium X4072(pYA248-AB),桥联法ELISA测定表明重组菌X4072(pYA248-AB)培养上清中AB的含量高于菌体裂解液,重组菌pYA248-AB在没有选择压力的情况下培养100代,随机挑选的重组菌全部都能生长,且在ELISA测定AB抗原时均显阳性.重组菌的生长曲线测定表明,X4072(pYA248)和X4072(pYA248-AB)的生长状态基本一致;口服重组菌株X4072(pYA248-AB)1.0×1010cfu.30d后,C57BL/6存活率仍为100%.成功构建了表达AB的无抗性的减毒鼠伤寒沙门菌疫苗X4072(pYA248-AB),体外实验表明重组质粒是稳定的,动物实验证明重组菌株是安全的;为防治幽门螺杆菌感染提供了口服活菌疫苗候选株.