S1核酸酶作用与微环DNA分子的克隆策略

摘要

米曲霉来源的S1核酸酶具有降解单链DNA或RNA的作用.在适当的条件下, 该酶能将不同的环形DNA分子从超螺旋转变成开环和线形结构,对质粒pUC19的实验证明, S1核酸酶的这种转变作用与加入的酶量呈正相关.在25μL总反应体积中,按100ng DNA加入5u至17u的S1核酸酶,能获得较高比例的线形DNA.由于微环DNA分子太小,单酶切位点的出现率较低,很难用常规方式进行克隆,以S1核酸酶进行线形化是微环DNA克隆的途径.pC3是已知最小的真核生物线粒体DNA类质粒(537bp),经 S1核酸酶线形化后,成功地克隆到pMD18-T载体上.