TP-PCR法构建抗人CD28嵌合抗体双启动子昆虫杆状病毒重组转移载体

摘要

为构建能同时表达抗人CD28嵌合重链和嵌合轻链基因的双启动子杆状病毒转移载体,利用PCR法扩增出抗人CD28鼠源性单抗的可变区基因和人IgG1的恒定区基因,再采用一种不需要限制性核酸内切酶和连接酶的新方法--三引物PCR(TP-PCR)法将两者拼接后分别插入杆状病毒转移载体pAcUW3的ph和p10启动子后,并通过酶切、电泳、PCR扩增和测序对重组体进行了鉴定.研究结果表明,TP-PCR法快速、方便、准确,无需设计外源的DNA序列,就能构建完好的融合表达基因.该转移载体的构建成功为嵌合抗体基因在昆虫细胞中的表达奠定了基础.