表达IBDV VP2融合蛋白的重组MDV的构建及其免疫特性

摘要

将增强型绿色荧光蛋白基因(eGFP)与鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的VP2基因融合,插入马立克氏病毒(MDV)CVI988/Rispens的非必需区US10片段中,成功构建表达VP2融合蛋白的MDV CVI988转移载体pUC18-US10-VP2.将转移载体质粒与CVI988/Rispens疫苗毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),筛选获得表达VP2融合蛋白的重组MDV(rMDV).聚合酶链式反应(PCR)和间接免疫荧光实验(IFA)证明,rMDV传至第31代仍能稳定表达VP2融合蛋白.用rMDV免疫SPF鸡,进行IBDV攻毒保护试验,1日龄SPF鸡分别用1000PFU、2000PFU、5000PFU的rMDV进行免疫,33日龄用100LD50的IBDV JS超强毒进行攻毒,鸡的免疫保护率分别为50%、60%、80%.值得注意的是,5000PFU的rMDV一次免疫1日龄SPF鸡,其法氏囊组织病理损伤等级与IBD中等毒力活疫苗常规二次免疫相当(2.0/1.5),其保护效果无显著差异(p＞0.05),而与非重组病毒免疫组相比较,保护效果差异显著(P＜0.01),这表明构建的表达IBDV VP2融合蛋白的rMDV可以有效地为SPF鸡提供免疫保护作用.