重组鲁西黄牛α干扰素融合蛋白的表达及其抗病毒活性研究

摘要

通过PCR从鲁西黄牛(Yellow cattle)基因组DNA中克隆了α干扰素(BoIFN-α)基因,并插入到pET32a+中,构建成重组原核表达质粒pET32a+/BoIFN-α,进行测序和诱导表达.测序结果表明,鲁西黄牛IFN-α基因全长498个核苷酸,含一个开放阅读框(ORF),编码166个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的牛α干扰素C亚型氨基酸组成同源性为97.6%.表达产物经SDS-PAGE分析.表达出40kD的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的26.7%.表达产物经镍离子螯舍次氨基三乙酸(Ni-NTA)素和层析纯化,纯化产物进行复性后在MDBK/VSV上的活性为5×105u/mg.重组牛IFN-α(rBoIFN-α)对牛轮状病毒(BRV)有一定的抑制作用,抗BRV病毒活性为1.5×105u/mg.结果显示从鲁西黄牛中克隆了IFN-α基因的一种新亚型,即BoIFN-α C2,并实现了高效表达,获得了具有较高抗病毒活性的重组干扰素产物,为重组牛干扰素的开发奠定了基础.