重组鸡α干扰素/白细胞介素-2复合蛋白在鸡体内外抗病毒活性研究

摘要

为了研究重组鸡α干扰素/白细胞介素-2复合蛋白（rChIFN-α-Linker-ChIL-2，重组复合蛋白）在鸡体内外抗病毒活性,本研究采用50％细胞病变抑制法进行了重组复合蛋白在 CEF细胞上抗水泡性口炎病毒（VSV）和传染性法氏囊病病毒（IBDV） LX强毒株的活性研究；采用 MTS法进行了重组复合蛋白促外周血T淋巴细胞（PBLC）和脾脏淋巴细胞增殖活性试验。将IBDV LX强毒株人工感染24日龄SPF鸡，分别于攻毒前3d（攻毒前组）、攻毒同时（同时组）、攻毒后24h（攻毒后组）使用重组复合蛋白，以筛选重组复合蛋白最佳使用时间试验。将IBDV LX强毒株人工感染24日龄SPF鸡，分别肌肉注射重组复合蛋白（注射组）与滴鼻点眼重组复合蛋白（滴鼻点眼组）进行最佳使用途径筛选试验。分别通过临床观察、检测攻毒前和攻毒后（days post challenge，dpc）不同时间排毒率、病毒在不同组织器官的动态分布、带毒时间、细胞免疫水平、体液免疫水平和分析外周血淋巴细胞亚群等指标的差异以揭示重组复合蛋白在鸡体内抗病毒和免疫增强作用机理，并且筛选重组复合蛋白在鸡体内发挥最佳抗病毒活性的最适使用时间和途径。
　　结果：重组复合蛋白在 CEF细胞上抗 VSV和 IBDV的活性单位分别为5.24×105 IU/mL和1.64×104IU/mL；重组复合蛋白具有显著的促 PBLC和鸡脾脏淋巴细胞的增殖活性。不同时间使用使用重组复合蛋白在鸡体的抗病毒活性存在差异。同时组传染性法氏囊病（IBD）典型症状持续时间、病死率、排毒率、外周血持续带毒率（72h、20％、31.6%、31.6%）最低，其次是攻毒前组（96h、30％、36.8%、36.2%）、攻毒后组（120h、40%、42.1%、47.4%）和攻毒阳性对照组（168h、70％、57.9%、52.6%）；同时组和攻毒前组鸡组织器官带毒时间比攻毒后组和攻毒阳性对照组缩短7d；同时组的组织器官带毒率（20.4%）显著低于攻毒前组和攻毒后组（27.1%、29.2%）；同时组鸡血清抗 IBDV抗体水平显著低于其它组；同时组鸡的血清中ChIL-2、ChIFN-γ、ChIL-6、ChIL-4表达水平（7 dpc~21 dpc）、ChIFN-α表达水平（7 dpc~14 dpc）显著高于其它组；3 dpc~14 dpc同时组鸡外周血T淋巴细胞、脾脏淋巴细胞增殖活性显著高于其他试验组；7 dpc~21 dpc攻毒组的CD4+/CD8+的比值显著低于其相应的对照组，同时组鸡外周血的 CD4+/CD8+的比值显著高于其他攻毒组。不同途径使用重组复合蛋白在鸡体的抗病毒活性存在差异。注射组鸡 IBD临床症状持续时间、病死率、排毒率、外周血持续带毒率（96h、30%、54.5%、32％）最低，其次是滴鼻点眼组（120h、50%、81.8%、48％）；注射组鸡不同器官的带毒时间、抗IBDV抗体水平显著低于其它组；注射组血清中 ChIL-2、ChIL-4、ChIL-6、ChIFN-r表达水平（7 dpc~21 dpc）、ChIFN-α表达水平（7 dpc~14 dpc）、鸡外周血 T淋巴细胞与鸡脾脏淋巴细胞增殖活性、外周血中 CD4+/CD8+细胞的比值最高，其次是滴鼻点眼组和攻毒阳性对照组。
　　结论：重组复合蛋白在体外具有显著的抗 VSV和 IBDV活性及促外周血 T淋巴细胞、促脾脏淋巴细胞增殖活性；重组复合蛋白通过提高机体细胞因子的表达水平、增强脾脏淋巴细胞和外周血 T淋巴细胞增殖活性、提高 CD4+/CD8+细胞的比值等方式增强机体细胞免疫和体液免疫应答水平，发挥其抗病毒活性；攻毒同时采用注射途径使用重组复合蛋白在鸡体内可发挥最佳的抗病毒活性。

目录

第1章 文献综述

1.1概述

1.2干扰素的研究进展

1.3鸡α干扰素的研究进展

1.4白细胞介素-2的研究进展

1.5细胞因子重组融合蛋白的研究进展

1.6 rChIFN-α-Linker-ChIL-2重组复合蛋白的研究进展

第2章 重组鸡α干扰素/白细胞介素-2复合蛋白体外活性研究

2.1材料

2.2方法

2.3结果

2.4 讨论

第3章 不同时间使用重组鸡α干扰素/白细胞介素-2复合蛋白在鸡体内抗IBDV活性研究

3.1材料

3.2方法

3.3结果与分析

3.4讨论

第4章 不同途径使用重组鸡α干扰素/白细胞介素-2复合蛋白在鸡体内抗IBDV活性研究

4.1材料

4.2方法

4.3结果与分析

4.4讨论

第5章 结论

参考文献

缩略语词汇表

致谢

攻读硕士学位期间的研究成果