猪γ-干扰素在重组杆状病毒中的表达及其抗病毒活性的测定

摘要

研究利用Bac-To-Bae杆状病毒表达系统构建含有猪γ干扰素(porcine intefferon-γ,PoIFN-Y)完整开放阅读框的供体质粒pFastBacTM 1-PoIFN-γ,转化DH10Bac 感受态细胞获得重组穿梭质粒rBacmid-PoIFN-γ,转染sf9胞救获表达PoIFN-γ的重组杆状病毒rBac-PoIFN-γ.以抗PoIFN-γ单克隆抗体为一抗进行Western blot、间接免疫荧光(IFA)及间接ELISA检测,结果表明:PolFN-γ在重组杆状病毒rBac-PoIFN-γ感染的昆虫细胞中获得正确表达.抗病毒活性试验显示,重组杆状病毒表达rPoIFN-γ能有效抑制水疱性口炎病毒(VSV)在猪肾细胞系(PK-05)的复制,rBae-PolFN-γ感染昆虫细胞培养上清抗病毒活性为2×104抑制单位(IU)/mL,其抗病毒活性可以被鼠抗原核表达重组PoIFN-γ免疫血清有效阻断.结果表明:rPoIFN-γ在重组杆状病毒rBae-PoIFN-γ在感染昆虫细胞获得有效表达,并具有高效抗病毒活性.