兔多杀性巴氏杆菌C51-3株黏附蛋白的表达、纯化及其抗原性检测

摘要

应用PCR从兔多杀性巴氏杆菌C51-3株基因组DNA中扩增出编码36 kD黏附蛋白的cp36基因,将其克隆到pMD18-T载体并对插入片段进行测序.以重组质粒pMD18-cp36为模板,用PCR扩增得到编码信号肽除外的成熟黏附蛋白基因cpm36,并克隆到原核表达质粒pQE30中,得到重组质粒pQE30-cpm36,转化大肠杆菌M15,在IPTG诱导下表达融合蛋白CPM36,经Ni2+-NTA亲和层析纯化.DNA测序结果表明cp36基因片段大小为1032 bp,与已报道的16个血清型多杀性巴氏杆菌cp36基因的核苷酸序列比较,同源性在76.9%～100%之间.SDS-PAGE结果显示,表达分子量约为37 kD的带有6xHis标签的CPM36蛋白,与预期分子量相符.Western blotting结果表明,抗重组蛋白抗体分别能与CPM36蛋白和多杀性巴氏杆菌36 kD蛋白发生特异性反应,证明原核表达蛋白具有抗原性,为进一步开展多杀性巴氏杆菌免疫保护性抗原的研究奠定了基础.