蛇毒类凝血酶calobin在毕赤酵母中的表达

摘要

蛇毒类凝血酶是临床上防治血栓栓塞性疾病的有效药物.参照朝鲜蝮蛇(Agkistrodon caliginosus,Korean Viper)类凝血酶calobin基因序列(GenBank AccessionNo.U32937.1),将人工合成的calobin基因克隆到酵母表达载体pPICZαA,于毕赤酵母中表达,得到了分子量约为32 kD的重组calobin蛋白,经甲醇诱导培养,表达产物可获得3.5 g/L的高表达量.重组蛋白经过阴离子交换柱Q-Sepharose Fast Flow和分子筛Sephacryl-S-100凝胶过滤层析等纯化步骤进行了初步纯化.纯化后的重组calobin可以在纤维蛋白原平板上形成水解圈,经SDS-PAGE实验显示,重组蛋白能水解纤维蛋白原的Aα链,产生一条约40 kD左右的降解带.在实验中未能发现重组calobin对纤维蛋白原的凝固作用.