重组人kallistatin蛋白在毕赤酵母中的高效表达及生物活性分析

摘要

为了研究kallistatin(Kal)的生物活性,本实验构建了可分泌表达Kal的毕赤酵母菌株.首先通过PCR方法从pAAv-Kal中扩增出Kal cDNA,并克隆至酵母表达载体pPIC9,得到甲醇酵母分泌型表达载体pPIC9-Kal,然后将载体线性化并电击转化毕赤酵母GS115(his4),通过MD平板筛选出阳性表达菌株.阳性表达菌株在BMMY培养基(pH 7.0)中29℃培养,经2%甲醇诱导表达96 h,摇瓶表达量可达14 mg/L.表达上清经Phenyl Superose、Heparin Sepharose FF分离纯化,目的蛋白纯度达到98%,分子量为58kDa.生物活性实验显示,所得到的Kal蛋白具有较好的抗氧化活性,过氧化物酶活性达到(163±4)U/(mg·min),可有效降低H_2O_2对LX-2细胞的氧化损伤.另外,重组产生的Kal还能抑制HUVEC细胞的增殖.本研究首次成功地利用毕赤酵母表达系统分泌表达了有生物活性的Kal,为继续开展其抗肿瘤活性奠定了基础.