共表达分子伴侣PDI和Ero1对灰盖鬼伞过氧化物酶在毕赤酵母中表达的影响

摘要

来源于灰盖鬼伞长度为1 092 bp的CiP目的基因与AOX1启动子一起整合进酵母染色体基因组中.重组蛋白CiP在酿酒酵母信号肽的引导下成功分泌到胞外,质谱鉴定为目的蛋白,成功在毕赤酵母中表达灰盖鬼伞过氧化物酶(CiP).将伴侣蛋白内质网氧化还原酶1(Ero1)、二硫键异构酶(PDI)分别单独及同时转入CiP酵母受体菌中,研究它们对CiP在毕赤酵母中表达的影响.结果表明:在摇瓶中,相对于无分子伴侣的菌株,单独整合PDI及同时整合Ero1、 PDI菌株的CiP酶活分别提高了2.43和2.62倍,活力达到316 U/mL和340 U/mL.挑选同时整合Ero1、PDI伴侣蛋白的CiP菌株,5L发酵罐进行高密度发酵,酶活最高达到3 379U/mL,比摇瓶提高约10倍.本实验结果较目前已报道的1 200U/mL已是最高水平.