抗A型流感病毒聚合酶碱性蛋白1多克隆抗体的制备和鉴定

摘要

流感病毒属于正黏病毒科,为有包膜包裹的单股负链RNA病毒.它的8个基因片段编码至少16种病毒蛋白,其中3个蛋白组成流感病毒的聚合酶复合体.流感病毒聚合酶碱性蛋白1 (PB1)是该复合体的组分之一,在病毒的转录、复制及重配中发挥重要的作用.为研究其功能,构建His-PB1 (aa 550-755)融合蛋白原核表达质粒,IPTG诱导融合蛋白表达,通过镍柱亲和将其纯化,然后作为抗原免疫家兔.对抗血清进行间接ELISA检测,表明抗体效价可达1∶100 000.兔源PB1蛋白抗血清经亲和纯化后,用于免疫印迹检测流感病毒WSN毒株PB1蛋白以及外源转染的FLAG-PB1蛋白,结果表明该PB1抗体具有良好的特异性,同时也能特异性识别其他亚型的A型流感病毒的PB1蛋白,为进一步研究流感病毒PB1蛋白的功能奠定了基础.