重组溶葡萄球菌酶的PEG定点修饰

摘要

为获得高抗菌活性聚乙二醇(PEG)定点修饰的溶葡萄球菌酶(Lysn),根据该酶的高级结构,在它的催化域和结合域上优选8个位点(Q9、N13、N40、T172、N174、G197、V240和T244),将其分别突变成半胱氨酸,纯化后的溶葡萄球菌酶突变体经DTT处理后与20 kDa的单甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺(mPEG-MAL)进行定点修饰反应,RP-HPLC分析显示PEG修饰率大于70％,修饰产物经MacroCap SP阳离子交换层析纯化后,PEG化溶葡萄球菌酶的纯度大于95％.比浊法和最小抑菌浓度(MIC)实验表明20K-PEG-LysnV240C和20K-PEG-LysnT244C的抗菌活性维持在原来的50％左右.研究结果为溶葡萄球菌酶全身给药治疗金黄色葡萄球菌感染奠定基础.