青霉素酰化酶基因的克隆与表达——Ⅱ 质粒pPA1的限制性酶切图及青霉素酰化酶基因的定位

摘要

前文报道重组质粒pPA1中9.1kb的EcoRⅠ片段上带青霉素酰化酶基因。用16种限制性内切酶消化pPA1,其中ApaⅠ,KpnⅠ,SacⅠ,SacⅡ,SmaⅠ及XhoⅠ等六种内切酶在pPA1上无切口,BamHⅠ,ClaⅠ,SphⅠ,BglⅡ为单切口,Sal为双切口,AvaⅠ,HindⅢ及PvuⅡ为三切口,EcoRⅤ为五切口。经交叉双酶解法测定各片段的大小,作出质粒pPA1的限制性酶切图。在包含青霉素酰化酶基因的9.1kbEcoRⅠ片段上,BglⅡ有一个切口,AvaⅠ,HindⅢ及PvuⅡ都有两个切口,而EcoRⅤ有四个切口;SalⅠ,BamHⅠ,ClaⅠ及SphⅠ不切9.1kb的EcoRⅠ片段。 HindⅢ切9.1kb EcoRⅠ片段为A（3.5kb）,B（2.7kb）及C（2,9kb）等三个片段。经HindⅢ部分水解后连接,转化大肠杆菌HB101得到一系列带不同HindⅢ片段的质粒的转化子,青霉素酰化酶活性测定证明其基因位于HindⅢ-A片段上。合成青霉素酰化酶仍需苯乙酸诱导,并被葡萄糖阻遏,HindⅢ-B片段的存在能增加青霉素酰化酶基因的表达,而C片段无显著影响。