应用高效体积排阻色谱偶联多角度激光散射鉴定猪圆环病毒2型灭活疫苗及病毒样颗粒疫苗抗原

摘要

本文旨在建立基于高效体积排阻色谱（high-performance size-exclusion chromatography,HPSEC）偶联多角度激光散射仪（multi-angle laser light scattering,MALLS）的猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2,PCV2）疫苗抗原检测方法。以纯化的PCV2灭活病毒及病毒样颗粒（virus-like particles,VLP）为参照，对4家生产企业的2种PCV2灭活病毒疫苗（a、b）及VLP疫苗（c、d）破乳后进行HPSEC-MALLS检测及分子量分析；结合PCV2抗原检测卡、Western blotting和透射电子显微镜（transmission electron microscope,TEM），鉴定了特征色谱峰；考察了方法的重复性和检测线性。结果表明，两家企业生产的PCV2灭活病毒疫苗破乳液水相经HPSEC分离，在保留时间约13.3 min处出现抗原特征峰；MALLS计算该色谱峰分子量分别为2.61×10~6 （±4.34%） Da和2.40×10~6 （±2.51%） Da。两种VLP疫苗也在13.3 min处出现抗原特征峰，分子量分别为2.09×10~6 （±2.94%） Da和2.88×10~6 （±11.85%） Da，接近PCV2的理论分子量；同时在保留时间约11.4 min处也出现色谱峰，经检测分子量为4.37×10~6 （±0.42%） Da,TEM表征显示为VLP二聚体。取疫苗d和PCV2 VLP纯品进行重复检测，抗原色谱峰面积的RSD （n=3）均小于1.5%，重复性好；将PCV2 VLP纯品梯度稀释检测，VLP及其多聚体的色谱峰面积与浓度均呈良好的线性关系，R2分别为0.999及0.997，能够满足定量及多聚体含量分析。该方法有望成为一种准确、高效的PCV2疫苗的体外评价方法，用于质量评价与提升。