定点突变提高里氏木霉木聚糖酶(XYN Ⅱ)的稳定性

摘要

通过定点突变的方法,在来源于里氏木霉Trichderma reesei的木聚糖酶XYNII的N-末端两个β折叠片层间添加二硫键,以提高木聚糖酶的稳定性。原酶XYN-OU和突变酶XYN-HA12（T2C、T28C和S156F）分别在毕赤酵母中分泌表达,突变酶与原酶纯化后进行酶学性质比较。结果表明：突变酶最适反应温度由50℃提高到60℃;在70℃的半衰期由1min提高到14min;最适反应pH为5.0,与原酶保持一致,但是在50℃、30min条件下的pH稳定范围由4.0-9.0扩展到3.0-10.0。对木聚糖酶分子改良的结果反映出在β片层间添加二硫键可以有效改善酶在较高温度下三维结构的刚性,提高热稳定性。