糖基转移酶GTBM的克隆、表达及其在芹菜素糖基化修饰中的应用

摘要

以耐有机溶剂菌库中的巨大芽孢杆菌(Bacillus megatherium)YZ08为模板,设计相关引物克隆出糖基转移酶基因bmgt,构建工程菌Ecoli BL21(DE3)/pET28a-bmgt,诱导表达获得了糖基转移酶GTBM.His-tag标签法纯化得到电泳纯的糖基转移酶GTBM,考察pH、温度、金属离子对酶活的影响及GTBM对二甲基亚砜(DMSO)的耐受性.建立糖基转移酶GTBM蔗糖合成酶SuSy双酶耦联催化体系,优化pH、温度、DMSO浓度、蔗糖浓度、酶液添加量等参数对双酶耦联糖基化芹菜素的影响.结果发现:GTBM有着较好的DMSO耐受性,在pH 7.5、温度35 ℃、10％(体积分数)DMSO、20 mmol/L蔗糖、0.1 mmol/L尿苷二磷酸(UDP)、60 mU/mL GTBM和20 mU/mL蔗糖合成酶SuSy条件下,芹菜素糖基化反应的转化率在4h达到95％,且产物单一.GTBM有着较好的DMSO耐受性、区域选择性和较高的糖基化芹菜素产率.