甾短杆菌胆固醇氧化酶基因在大肠杆菌中的表达

摘要

为了实现胆固醇氧化酶在大肠杆菌中的表达,将甾短杆菌 Brevibacterium sp.DGCDC-82胆固醇氧化酶基因用PCR的方法去掉信号肽序列,连接到质粒pTrc99a,通过筛选得到了表达胆固醇氧化酶的重组菌JM109/pTrc99a-COD.经IPTG诱导后表达出相对分子质量约为5.5×104的蛋白质.分别考察了诱导温度、时间、IPTG浓度等因素对重组菌表达的胆固醇氧化酶的影响.在优化条件下,该胆固醇氧化酶的酶活可以达到700U/L.酶学特性分析表明其反应的最适pH为7.5,最适温度为40 ℃.